细胞小室

"ABconal MultiF Seamless Assembly是一种简单、快速目高效的DNA无克隆技术，可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化，在插入片段正/反向PCR引物5端引入线性化载体的未端序列，使得PCR产物5和3 最未端分别带有和线性化载体两未端一致的同源序列(Overlaps.5-25 bo)。这种两端带有载休未端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后，在持定酶混合物的催化下，50反应15-60 min即可进行转化，完成定向克降。ABclonal MuliF Seamless Assembly Mix作为新一代的无克隆试剂，针对多片段无缝组装反应进行了优化，可以一次实现多至5个插入片段的特定顺序组装克降。使用该试剂，无需考虑插入片段自身携带的酶切位点。2X预混液包含高度优化的反应缓冲液和增强的酶混合物，可显著提高片段的无缝组装效率与对杂质的耐受度，使得线性化载体与入片段不进行纯化直接用于无缝克降成为可能。极大地简化了实验步骤、无缝组装后的产物是完全封闭的双链DNA，可直接用于下.步PCR、RCA或其它分子生物学操作(例如转化到感受态细胞》。该方法可成功组装包含15-80 p末端一致序列的片段，可以组装长达上百kb的DNA片段